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    致突变试验:根据受试物的化学结构、理化性质及对遗传物质作用终点(基因突变和染色体畸变)的不同。要求新药必须做下列三项试验。

  (1)微生物回复突变试验

    菌株:组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(Styphimurium)四株(TA97、TA98、TA100、TA102),亦可采用大肠杆菌(E.Coli)WP2若干株(大肠杆菌试验)。
    剂量:决定受试物最高剂量的标准是细菌毒性和溶解度。一般最大剂量可达5mg/皿。受试物至少应有五种不同剂量否则应说明选定剂量的理由。
    代谢活化:应用诱导剂处理后的哺乳动物肝脏微粒体酶(S9)进行体外代谢活化试验,即在加S9混合物和不加S9混合物平行的条件下测试。
    对照组:用溶媒作阴性对照,用已知突变原作阳性对照。
    结果判定:受试物的回复突变菌落数的增加与剂量相关并有统计学意义,或至少某一测试点呈现可重复的并有统计学意义的阳性反应时记为阳性。

  (2)哺乳动物培养细胞染色体畸变试验

    细胞:哺乳动物原代或传代培养细胞。
    剂量:至少应用三种不同剂量,高剂量以50%细胞生长抑制浓度为基准,否则应说明选定剂量的理由。
    标本制作时间:药物与细胞接触后应有适当时间最好包括整个细胞周期,通常在药物处理后24和48小时制作染色体标本。
    代谢活化:应用适当的代谢活化法。
    对照组:用溶媒作阴性对照,已知突变原作阳性对照。
    镜检:每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构的异常及多倍体的出现率。
    结果判定:受试物诱发的染色体畸变的出现率较阴性对照有统计学意义的增加,并有剂量反应关系时记为阳性,同时标明异常细胞出现的频度和种类。
  (3)体内试验

     一般选用微核试验,但作用于生殖系统的药物进行显性致死试验等。
    a.啮齿类动物微核试验
    动物:一般用小鼠,每组10只性成熟动物(雌雄各半)或至少6只性成熟雄性动物。
    给药剂量及途径:至少采用三种剂量,最高剂量从1/2LD50为基准,腹腔和/或口服一次给药,必要时可连续给药。否则应说明选定剂量的理由。
    对照组:用溶媒作阴性对照,已知能诱发微核阳性的物质作阳性对照。
    标本制作:给药后18—30小时或12—72小时处死动物,取骨髓,离心、涂片,Giemsa染色或吖啶橙染色。

    镜检:每只动物至少观察计数1000个多染红细胞,观察其微核出现的频度及多染红细胞和正成红细胞的比率。
    结果判定:微核细胞出现的频度与对照组相比有统计学意义的增加,并有剂量反应关系时,或同一剂量有重复性并有统计学意义时记为阳性。
    b.啮齿类动物显性致死试验
    动物:性成熟的啮齿类动物,一般采用小鼠。每组至少15只雄鼠。
    给药剂量及途径:至少采用三种剂量,但在初期评价中单剂量或二种剂量即可。高剂量以30日连续给药使100%动物生存的最大耐受量为基准。口服或腹腔注射可采用一次给药、每天给药一次,连续给药5天或连续给药6周的方法之一。
    交配方法:给药的雄性动物以适当的时间间隔依次与未给药的雌性动物交配,交配时间取决于给药方式,一般一次或连续给药5天的动物,以最后给药后6周内为交配时间;连续给药6周的动物以最后给药后一周内为交配时间。
    对照组:用溶媒作阴性对照,已知能诱发显性致死阳性的物质作阳性对照。但在同一实验室,对同一品系的动物,可不设阳性对照。
    观察指标:交配的雌性动物在妊娠后期剖腹,观察子宫内胚胎着床数,生存胎仔数,死亡胎仔数及未着床数。显性致死率以DL表示
DL(%)=
         试验组妊娠鼠的平均生存胎仔数
(1- ——————————————————)×100%
         阴性对照组妊娠鼠的平均生存胎仔数

    结果判定:死亡胎仔数的增加,胚胎着床总数的减少,或未着床胚胎数的增加,生存胎仔总数减少,这些结果有统计学意义并有剂量反应关系时记为阳性显性致死效应。
〔注〕上述三项致突变试验结果难以下结论时,可选择其他补充试验予以确证。


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